陕西依科生物技术服务有限公司是一家专业提供病理诊断服务的独立医学检验所,主要包括西宁病理技术服务、西宁HE染色、西宁石蜡包埋、病理切片扫描等,其中以分子病理为基础的精准服务是本公司特色、以数字病理为纽带的多学科综合诊疗服务是本公司的优势。 咨询热线:13572593771

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西宁Western blot原理及实验流程

发布日期:2021-4-28 10:15:00来源:http://xn.sxyksw.com/news602495.html

详细介绍

陕西依科生物技术服务有限公司是一家专业提供病理诊断服务的独立医学检验所,主要包括西宁病理技术服务、西宁HE染色、西宁石蜡包埋、病理切片扫描等,其中以分子病理为基础的精准服务是本公司特色、以数字病理为纽带的多学科综合诊疗服务是本公司的优势。

一、Western blot原理及应用

WB是一种把电泳分离的西宁蛋白组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,而后采用抗体作为探针进行特定蛋白检测的技术。

WB主要应用:对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析,旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。

依科生物WB服务内容:从蛋白提取开始,进行电泳转印、封闭、抗体孵育及ECL发光,最终进行基于图像灰度值的定量分析。

依科生物提供的实验报告中包括实验基本流程、蛋白定量原始数据、抗体孵育方式、图像灰度值分析及曝光原始图像。

二、Western blot实验流程

1、样本制备:蛋白提取、定量及变性。

2、电泳转印:蛋白SDS-page凝胶电泳后将蛋白转印至PVDF膜或者NC膜

3、封闭:使用封闭液封闭PVDF膜上未结合蛋白的小孔。

4、抗体孵育:一定条件下使一抗与目标蛋白结合,二抗与一抗结合。

5、发光成像:使用化学发光成像进行条带显色。

6数据处理:使用imageJ分析图像灰度值。

三、实验结果展示:


四、您需要提供的信息及物质

1、样本种属和指标名称

2、抗体,包括货号及说明书

3、实验样本

未用完的样本和抗体可以返还

五、样本收集和运输

1、组织样本

收集: 取材应在冰上进行,取材后组织用生理盐水冲洗干净,去除血渍和污物,并剔除非研究所需的组织;

保存:吸干水渍并切小块,放入已标记的冻存管中,液氮速冻后,转运至-80℃冰箱,可以保存半年左右;

运输:使用大体积干冰运输;

2、细胞样本

贴壁收集:细胞培养或处理结束后,去除培养液,用预冷的PBS缓冲液快速冲洗细胞以去除培养基,而后加入少量预冷的PBS,使用细胞刮刀将细胞刮下,移于1.5ml离心管中,4℃1500rpm离心去除上清;得到的沉淀为细胞样本。

悬浮细胞:细胞培养或处理结束后于4℃1500rpm离心去除上清培养基,加入预冷PBS轻柔吹打重悬细胞并转移至1.5ml离心管中,4℃1500rpm离心去除上清PBS以洗去培养基,洗涤操作需要重复一次。最后离心得到的沉淀为细胞样本。

保存:液氮速冻后于-80 ℃冰箱中保存,可以保存半年左右。

运输:使用大体积干冰运输;

3、特殊样本:植物、细菌或者做过特殊处理的样本需要联系客服进行沟通。


陕西依科生物技术服务有限公司尊重以人为本,提倡绿色医疗。致力于西宁病理技术服务、西宁HE染色、西宁石蜡包埋等科研领域,力争在未来发展成国内一流的专业病理和分子诊断服务的研发机构!